磷脂酰絲氨酸納米脂質(zhì)體的制備及其跨血腦屏障能力評估

磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）是一種富含于神經(jīng)細胞膜的磷脂，具有改善認(rèn)知功能、保護神經(jīng)細胞等作用，但其臨床應(yīng)用受限于難以跨越血腦屏障（Blood-Brain Barrier，BBB），將它包載于納米脂質(zhì)體中，可通過優(yōu)化載體性質(zhì)增強其跨BBB能力，以下從制備方法和跨BBB能力評估兩方面展開說明。

一、納米脂質(zhì)體的制備方法

納米脂質(zhì)體的制備需結(jié)合磷脂酰絲氨酸的理化性質(zhì)（如親水性頭部和疏水性尾部結(jié)構(gòu)），選擇合適的材料與工藝，以實現(xiàn)高包封率、均一粒徑及穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。

材料選擇

主要膜材：除磷脂酰絲氨酸外，通常需搭配其他磷脂（如大豆磷脂、蛋黃卵磷脂）調(diào)節(jié)膜流動性，加入膽固醇穩(wěn)定脂質(zhì)bilayer結(jié)構(gòu)，減少藥物泄露。

輔料：可添加聚乙二醇（PEG）衍生物（如DSPE-PEG2000）修飾脂質(zhì)體表面，形成“隱形”涂層，降低網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除，延長循環(huán)時間；也可引入靶向配體（如轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、肽段T7），通過BBB表面受體（如轉(zhuǎn)鐵蛋白受體）介導(dǎo)主動靶向。

常用制備工藝

薄膜分散法：將磷脂酰絲氨酸與其他磷脂、膽固醇等溶于有機溶劑（如氯仿、甲醇），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，形成均勻脂質(zhì)薄膜；加入緩沖液（如PBS）水化薄膜，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，得到納米級脂質(zhì)體。該方法操作簡便，適用于實驗室小規(guī)模制備，但包封率可能受其親疏水性影響。

乙醇注入法：將脂質(zhì)混合物溶于乙醇（有機相），快速注入攪拌中的水相（含磷脂酰絲氨酸或空白緩沖液），乙醇擴散后脂質(zhì)自組裝形成脂質(zhì)體，再經(jīng)超濾或透析去除游離藥物和乙醇。此方法無需劇烈剪切，對磷脂酰絲氨酸的穩(wěn)定性影響較小，可通過調(diào)節(jié)乙醇濃度和注入速度控制粒徑。

乳化-溶劑揮發(fā)法：將脂質(zhì)溶于有機溶劑（如二氯甲烷）作為油相，磷脂酰絲氨酸水溶液作為水相，高速攪拌形成W/O型乳劑；揮發(fā)有機溶劑后，脂質(zhì)體在水相中固化，經(jīng)均質(zhì)處理得到納米顆粒，該方法適用于水溶性藥物的包載，可提高它的包封率。

高壓均質(zhì)法：通過高壓均質(zhì)機的機械剪切力，將粗脂質(zhì)體分散為粒徑均一的納米脂質(zhì)體（通常100-200nm），適合工業(yè)化放大生產(chǎn)，能保證批次穩(wěn)定性。

制備后優(yōu)化

需通過單因素實驗或響應(yīng)面法優(yōu)化工藝參數(shù)，如脂質(zhì)組成比例（PS與其他磷脂的比例）、膽固醇含量、藥脂比、均質(zhì)壓力/次數(shù)等，以達到理想的粒徑（通常50-300nm，利于BBB穿透）、zeta電位（近中性或弱負電，減少與血漿蛋白非特異性結(jié)合）和包封率（需≥60%以保證載藥量）。

二、跨血腦屏障能力評估方法

評估磷脂酰絲氨酸納米脂質(zhì)體的跨BBB能力需結(jié)合體外模型、體內(nèi)實驗及成像技術(shù)，從定性和定量角度驗證其穿透效率及靶向性。

體外BBB模型評估

細胞模型：常用人腦微血管內(nèi)皮細胞（HBMEC）與星形膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)，構(gòu)建類似BBB的單層屏障，通過測定跨內(nèi)皮細胞電阻（TEER）驗證屏障完整性。將熒光標(biāo)記的磷脂酰絲氨酸 納米脂質(zhì)體加入模型頂端（模擬血液側(cè)），檢測基底側(cè)（模擬腦側(cè)）的熒光強度，計算穿透率；或通過共聚焦顯微鏡觀察內(nèi)皮細胞對脂質(zhì)體的攝取情況，分析其內(nèi)化機制（如被動擴散、受體介導(dǎo)的胞吞）。

類器官模型：利用干細胞誘導(dǎo)構(gòu)建腦類器官，其內(nèi)部形成類似腦微血管的結(jié)構(gòu)，可更真實模擬BBB微環(huán)境。通過免疫熒光染色觀察磷脂酰絲氨酸納米脂質(zhì)體在類器官內(nèi)的分布，評估其穿透深度和靶向性。

體內(nèi)動物實驗評估

示蹤與定量：對磷脂酰絲氨酸納米脂質(zhì)體進行熒光標(biāo)記（如Cy5.5、DiR）或放射性核素標(biāo)記（如 ¹⁸F、⁶⁴Cu），經(jīng)尾靜脈注射后，在不同時間點處死動物，分離腦組織，通過熒光分光光度計或放射性計數(shù)儀測定腦內(nèi)藥物含量，計算腦靶向效率（腦內(nèi)藥物濃度/血液藥物濃度），與游離 PS 或未修飾脂質(zhì)體對比，驗證納米載體的優(yōu)勢。

成像分析：利用活體成像技術(shù)（如熒光成像、PET成像）實時監(jiān)測磷脂酰絲氨酸納米脂質(zhì)體在體內(nèi)的分布，觀察其是否富集于腦組織，尤其是特定腦區(qū)（如海馬體，與認(rèn)知功能相關(guān)）。通過冷凍切片和免疫熒光染色，可進一步觀察脂質(zhì)體在腦內(nèi)血管周圍及神經(jīng)細胞中的定位。

機制驗證

若脂質(zhì)體表面修飾了靶向配體，需通過競爭性抑制實驗驗證其跨BBB機制：在體外模型或動物實驗中加入過量游離配體（如游離轉(zhuǎn)鐵蛋白），若磷脂酰絲氨酸納米脂質(zhì)體的穿透率顯著下降，說明其跨BBB依賴受體介導(dǎo)的主動運輸，而非單純被動擴散。

安全性評估

跨BBB能力評估需伴隨安全性驗證，如檢測動物注射后是否出現(xiàn)炎癥反應(yīng)（如細胞因子水平升高）、腦微血管損傷（如伊文思藍滲漏實驗），或通過病理切片觀察腦組織是否存在異常形態(tài)變化，確保磷脂酰絲氨酸納米脂質(zhì)體在穿透BBB的同時不破壞屏障完整性。

三、總結(jié)與挑戰(zhàn)

磷脂酰絲氨酸納米脂質(zhì)體的制備需通過材料修飾和工藝優(yōu)化，平衡其穩(wěn)定性與穿透性；跨BBB能力評估則需結(jié)合多層次模型，從體外到體內(nèi)全面驗證其效率與機制。目前的挑戰(zhàn)在于如何進一步提高靶向性（減少非特異性分布）和穿透效率（應(yīng)對BBB的多重屏障作用），未來可通過智能響應(yīng)型脂質(zhì)體（如pH敏感或酶敏感材料）實現(xiàn)BBB處的精準(zhǔn)釋放，為磷脂酰絲氨酸在神經(jīng)退行性疾病處理中的應(yīng)用提供支撐。

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